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还在为液相色谱压力不稳而苦恼?这几招帮你轻松搞定

2017-09-14 15:56:53  来源: 检测家

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处于良好操作状态的泵,应该能使色谱图上的基线平稳,保留时间的重复性好。在等度洗脱时压力波动小于2%,梯度洗脱时压力变化应是缓慢平稳的。

压力不稳是高压液相色谱仪(HPLC)最为常见的故障,其表现为压力在一段时间逐渐变化(升高或降低);压力瞬间变化(>3kg)。

在日常使用过程中出现压力不稳的现象,其基本的故障和解决方法如下:


确定系统连接、色谱柱是否正常


压力为0的时候观察是否还有液体流出?如果压力为0流速仍然正常说明压力传感器或者显示界面有问题。如果没有流动相流出说明可能是管路断开和泵头上下单向阀都有气泡聚集(可能性更大)。这种情况下产生气泡的原因大致有三个:流动相没有超声脱气、过滤沉子污染、单向阀污染(没有清洗干净)。

在冲洗时如果有别的色谱柱也可以更换下色谱柱,排除下是不是色谱柱还有样品没有洗脱导致有峰出现。


管路里有气泡


气泡的产生一般是流动相中溶解了空气造成的,不仅影响流量的准确性,也导致泵压不稳。此时需要打开排空阀,用针筒多抽几下,排出气泡。再用流动相冲洗一段时间。为了加快排出气泡,还可以关紧排空阀,堵住检测器上的背压管,使流通池的压力增加,赶出气泡(但需注意不能压力太高,以免损坏流通池)。

如果发现连接过滤头的输液管中有微小的气泡流动时,这说明过滤头有堵塞现象必须清洗,此时可用10%的硝酸进行超声处理,如果还有气泡残留则必须更换新滤头。

避免气泡的产生最简单的方法就是流动相超声脱气处理,再者就是在线脱气处理装置。


漏液


在排除了气泡的问题之后,要检查的是输液泵有没有漏液现象,一般接在泵后的管道漏液会使压力降低,对压力稳定性影响不大。如果泵内柱塞垫或柱塞杆磨损了那就不一样了,它不仅压力上不去、变化大、流量也不足。只要观察到泵头或冲洗管漏液(有冲洗瓶时液位会升高),柱塞垫或柱塞杆肯定有问题。

其他接口处的漏液通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决问题。但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题,就必须将接头取下,检查是否损坏(例如,卡套损坏、密封表面有杂质);损坏的接头应该更换掉。


单向阀出现问题


当有盐份或者杂质等污染物附着在单向阀内球体和阀体表面时,就会破坏密封性,造成输液的单向阀性能降低,泵虽然在工作,但就是输送不好液体,严重时不能输液。反映到压力上,表现为严重不稳或没有压力。这时你可以卸下单向阀,用异丙醇超声清洗20分钟。如果有盐份,再用热水超声清洗一遍效果会更好。

若清洗后还达不到要求,可将单向阀再接到流路上用大流量异丙醇冲洗。单向阀的结构比较精细,如果没有把握最好先不要分解清洗,用超声波清洗时要注意摆放的位置防止部件震散,否则装配后效果会不理想。当单向阀内的球体损伤时就只有更换了。

如果清洗单向阀不能解决问题,更换单向阀上的过滤垫再进行测试。



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